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Chinese Name

中文名


D-熒光素鉀

English Name

英文名


D-Luciferin Potassium salt

Alias

別名


(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylic acid potassium salt;Firefly Luciferin potassium salt


CAS NO.


15144-35-9

Formula

分子式


C11H7KN203S2

M.W.

分子量


318.41

Class

分類


生化試劑



活體成像技術(shù)(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術(shù),生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學(xué)發(fā)光的原理,將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動(dòng)物體內(nèi),與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng)利用光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)光強(qiáng)度,間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域,最常用的有腫瘤或疾病動(dòng)物模型的建立,并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。

原理:常見(jiàn)的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲(chóng)熒光素酶(firefly luciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renilla luciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長(zhǎng)不同),當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。

應(yīng)用:

1)體外化學(xué)發(fā)光分析(in vitro);

2)活體成像實(shí)驗(yàn)(in vivo);

3)高靈敏度ATP分析;

4)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析;

5)廣泛用于報(bào)告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析;

步驟:

Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays /體外生物發(fā)光檢測(cè)

1)用33.3 mL蒸餾水溶解1.0 g D-熒光素,配制成100 mM的儲(chǔ)存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。

2)用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。

3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。

4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析。

Protocol 2:In vivo analysis /活體成像分析

1)用無(wú)菌的PBS(w/o Mg2+、Ca2+)配制D-熒光素工作液(15mg/mL),0.2 um濾膜過(guò)濾除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。

2)注射量取決于注射方式,具體如下:

注射方式劑量靜脈注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15 mg/mL熒光素工作液 腹腔注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15 mg/mL熒光素工作液肌肉注射(27 gauge針頭)50 uL,濃度為1–2 mg/mL熒光素工作液鼻內(nèi)注射(pipette)50 uL,濃度為3 mg/mL熒光素工作液3)注射入體內(nèi)5-10分鐘后,進(jìn)行成像分析。

溶解:0.25%濃度溶解于甲醇,形成近乎無(wú)色至淺黃色的清夜

保存:-15°C 避光



1. Barth et al. Molecular Therapy. 2008, 16. 957-964.
2. Mahller et al. Cancer Research. 2008, 68 (4). 1170-1179.
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